服務熱線
021-59989018
產品簡介:
產品型號:50T
廠商性質:經銷商
訪問量:215
更新時間:2021-06-15
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
麻疹病毒核酸檢測試劑盒廠家 | 50T | HE60962-R |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
尼泊金酯-d4 Methyl Paraben-d4 362049-51-2 質量規格:美國進口
尼泊金芐酯 Benzyl Paraben 94-18-8 質量規格:美國進口
尼泊金乙酯 Ethyl Paraben 120-47-8 質量規格:美國進口
四環素磷酸復鹽 Tetracycline phosphate complex 1336-20-5 質量規格:美國進口
四環素 Tetracycline 60-54-8 質量規格:進分
4-鹽酸差向四環素 4-Epitetracycline hydrochloride 23313-80-6 質量規格:美國進口
四環素-d6 Tetracycline-d6 60-54-8 (unlabeled) 質量規格:美國進口
4-差向-四環素-d6 4-epi-Tetracycline-d6 79-85-6 (unlabeled) 質量規格:美國進口
4-差向-四環素 4-Epi-Tetracycline 79-85-6 質量規格:美國進口
四環素10-O-b-D-半乳糖皮蒽 Tetracycline 10-O-b-D-galactopyranoside 319426-63-6 質量規格:美國進口
米格列奈鈣 Mitiglinide Calcium 145375-43-5 質量規格:美國進口
麻疹病毒核酸檢測試劑盒廠家PL12抗體/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結腸癌細胞英文名稱:COLO 205
抗SS-B/La抗體ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結腸癌細胞英文名稱:HCT-15
纖維介素蛋白(fgl2)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結腸癌細胞英文名稱:HT-29
小鼠β血小板球蛋白/β血栓環蛋白(β-TG)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結腸癌長春新堿耐藥株英文名稱:HCT-8/V
鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結腸癌紫杉醇耐藥英文名稱:HCT/Taxol
大鼠巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結腸平滑肌細胞*培養基100mL
牛熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 結腸粘膜上皮細胞*培養基100mL
銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結直腸腺癌上皮細胞英文名稱:DLD-1
小鼠C肽(C-Peptide)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結直腸腺癌細胞英文名稱:HCT-15
大鼠高靈敏度促狀腺激素(U-TSH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 晶體上皮細胞英文名稱:SRA01/04
小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 結直腸腺癌細胞英文名稱:Caco-2
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
8.公司產品僅用于科研。