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產品簡介:
產品型號:
廠商性質:經銷商
訪問量:278
更新時間:2021-06-16
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
水貂源性成分核酸檢測試劑盒廠家 | 50T | HE61315-R |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
8.公司產品僅用于科研。
1,4,7-三氮雜環壬烷(>98.0%(GC)) 1,4,7-Triazacyclononane 4730-54-5 質量規格:>98.0%(GC) 通用型蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
1,4,7-基-1,4,7-三氮雜環壬烷(含穩定劑碳酸氫鈉) 1,4,7-Trimethyl-1,4,7-triazacyclononane (stabilized with NaHCO3) 96556-05-7 質量規格:>98.0%(GC)(T) 通用型籽瓜細菌性果斑?。ˋcidovorax avenae subsp.citrulli;Aac)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
1,4,8,11-四硫代環十四烷(>98.0%(GC)) 1,4,8,11-Tetrathiacyclotetradecane 24194-61-4 質量規格:>98.0%(GC) 通用型密執歲棍狀桿菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganenesis;Cmm)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
1,4,7-三硫雜環壬烷(>98.0%(GC)) 1,4,7-Trithiacyclononane 1707085 質量規格:>98.0%(GC) 通用型密執安棒狀桿菌壞腐亞種(Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus;Cms)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
1,4,8,11-四氮雜環十四烷-1,4,8,11-四乙酸四乙酯(>97.0%(GC)) Tetraethyl 1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane-1,4,8,11-tetraacetate 126320-57-8 質量規格:>97.0%(GC) 通用型青枯菌/茄科雷爾氏菌(Ralstonia solanacearum;Rs)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7-三乙酸三叔丁酯(>93.0%(N)) Tri-tert-butyl 1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7-triacetate 122555-91-3 質量規格:>93.0%(N) 通用型柑橘頑固病螺原體(Spiroplasma citri;Sc)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯(>97.0%(T)) Tri-tert-butyl 1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetate 137076-54-1 質量規格:>97.0%(T) 通用型細菌性葉枯?。╔anthomonas;Xan)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
4-叔丁基杯[8]芳烴(>98.0%(HPLC)) 4-tert-Butylcalix[8]arene 68971-82-4 質量規格:>98.0%(HPLC) 通用型甘蔗白條?。╔anthomonas albilineans;Xalb)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
4-叔丁基杯[4]芳烴(>98.0%(HPLC)) 4-tert-Butylcalix[4]arene 60705-62-6 質量規格:>98.0%(HPLC) 通用型野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris;Xc)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
4-叔丁基杯[5]芳烴(>98.0%(HPLC)) 4-tert-Butylcalix[5]arene 81475-22-1 質量規格:>98.0%(HPLC) 通用型十字花科蔬菜黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.armoraciae; Xcarm)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
杯[8]芳烴(>90.0%(HPLC)) Calix[8]arene 82452-93-5 質量規格:>90.0%(HPLC) 通用型野油菜黃單胞秋海棠致病變種(Xanthomonas campestris pv.begoniae; Xcb)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
杯[6]芳烴(>95.0%(HPLC)) Calix[6]arene 96107-95-8 質量規格:>95.0%(HPLC) 通用型野油菜黃單孢菌柑桔致病變種(Xanthomonas campestris pv. Campestris;Xcc)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
4-叔丁基杯[6]芳烴(含5-10%的)(>98.0%(HPLC)) 4-tert-Butylcalix[6]arene (contains 5-10% Benzene) 78092-53-2 質量規格:>98.0%(HPLC) 通用型野油菜黃單孢菌柑桔致病變種(Xanthomonas campestris pv.citri;Xccit) 基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
4-磺酰杯[4]芳烴水合物(>94.0%(T)) 4-Sulfocalix[4]arene Hydrate 112269-92-8 質量規格:>94.0%(T) 通用型野油菜黃單胞萬年青致病變種(Xanthomonas campestris pv.dieffenbachiae;Xcd)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
水貂源性成分核酸檢測試劑盒廠家2×SYBR Green PCR Mastermix 200T 支
Oxysophoridine 氧化槐定堿 54809-74-4 20mg
Rooting Powder 生根粉 100g 瓶
4%多聚甲醛 500ml 瓶
Evans Blue 埃文斯藍 1g 瓶
普通RIPA組織-細胞裂解液 100ml 瓶
D N A M arker
Amylopentaose 麥芽五糖 34620-76-3 10mg
Guanosine5-Tiphosphate (GTP) 10mg 瓶
次高分子量蛋白質Marker 10T 支
dNTPs Mix(2.5mM each) 500ul 支
胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚紅 100ml 瓶
大鼠 TTC9C 基因全長ORF克隆
CYYR1 基因全長ORF克隆
LILRB3 / LIR3 / ILT5 / CD85a 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
重組大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (Fc 標簽)
Fetuin-A / AHSG / FETUA ELISA配對抗體
IL6 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
PTPN12 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 TNFSF15 基因全長ORF克隆
大鼠 CDH12 基因全長ORF克隆
PEX11A 基因全長ORF克隆
IFNγR1 / CD119 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 RPL11 基因全長ORF克隆
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